हाल ही में, शांदोंग विश्वविद्यालय के क्यूलु मेडिकल कॉलेज के चुनहोंग मा, चुनयांग ली और शिनयिन लियू के नवीनतम शोध परिणाम साइंस ट्रांसलेशनल मेडिसिन पत्रिका में प्रकाशित हुए।
200,000 से अधिक यौगिकों की जांच करने के बाद, अनुसंधान दल ने सफलतापूर्वक एक छोटे अणु यौगिक, ML-T7 की पहचान की, जो TIM-3 को लक्षित करता है। इन विवो और एक्स विवो प्रयोगों के परिणामों से पता चला कि ML-T7 CD8-पॉजिटिव T-कोशिकाओं और CAR-T-कोशिकाओं की ट्यूमर-रोधी गतिविधि को बढ़ाने में सक्षम था, और अकेले उपचार ने चूहों में ट्यूमर की प्रगति को सीधे बाधित किया, और PD-1 अवरोधकों के साथ एक सहक्रियात्मक प्रभाव डाला।
टीआईएम-3 एक झिल्ली प्रोटीन है, जिसके आईजीवी संरचनात्मक डोमेन में एक अनूठी संरचना होती है, जिसे एफजी-सीसी' क्लेफ्ट के रूप में जाना जाता है, जो इसके लिगैंड फॉस्फेटिडिलसेरिन (पीटीडीएसईआर) और कार्सिनोइम्ब्रियोनिक एंटीजन-संबंधी कोशिका आसंजन अणु 1 (सीईएसीएएम1) के लिए एक अत्यधिक संरक्षित बंधन स्थल है।
टीआईएम-3 एक झिल्ली प्रोटीन है, जिसके आईजीवी संरचनात्मक डोमेन में एक अनूठी संरचना होती है, जिसे एफजी-सीसी' क्लेफ्ट के रूप में जाना जाता है, जो इसके लिगैंड फॉस्फेटिडिलसेरिन (पीटीडीएसईआर) और कार्सिनोइम्ब्रियोनिक एंटीजन-संबंधी कोशिका आसंजन अणु 1 (सीईएसीएएम1) के लिए एक अत्यधिक संरक्षित बंधन स्थल है।
इस अध्ययन में, टीम ने कार्यात्मक स्क्रीनिंग रणनीति के साथ संयुक्त वर्चुअल स्क्रीनिंग के माध्यम से स्पेक्स डेटाबेस में 204,380 छोटे अणु यौगिकों से एमएल-टी7 की पहचान की।
सरफेस प्लाज़्मोन रेज़ोनेंस (एसआरपी) और आणविक गतिशीलता और क्रिस्टल संरचना विश्लेषण जैसी तकनीकों का उपयोग करते हुए, टीम ने पुष्टि की कि एमएल-टी7 विशेष रूप से टीआईएम-3 के एफजी-सीसी’ क्लीफ़्ट को लक्षित कर सकता है और इसमें पीटीडीएसईआर और सीईएसीएएम1 की तुलना में टीआईएम-3 के लिए उच्च आत्मीयता है। एमएल-टी7 एफजी-सीसी’ क्लीफ़्ट के माध्यम से टीआईएम-3 से अपने बंधन को स्थिर करता है, जिससे पीटीडीएसईआर, सीईएसीएएम1 बंधन और अंतःक्रिया के लिए टीआईएम-3 का बंधन बाधित होता है।
एमएल-टी7 की स्क्रीनिंग और लक्षण-निर्धारण
इन विट्रो प्रयोगों और माउस मॉडल प्रयोगों के परिणामों से पता चला कि टीआईएम-3 को लक्षित करके, एमएल-टी7 सीडी8-पॉजिटिव साइटोटोक्सिक टी कोशिकाओं की उत्तरजीविता, प्रसार और ट्यूमर-रोधी गतिविधि को बढ़ावा देने और कार्यात्मक कमी को रोकने में सक्षम था। एमएल-टी7 उपचार के परिणामस्वरूप आईएल-2/एसटीएटी5 संकेतन मार्ग का अपरेगुलेशन, आईएफएन-, टीएनएफ-, और आईएल-2 जैसे प्रभावकारी कारकों का अपरेगुलेशन, और सक्रियण मार्करों (सीडी25 और सीडी69) की अभिव्यक्ति, और स्टेम सेल लक्षण-संबंधी साइटोकाइन (टीसीएफ1) अभिव्यक्ति के स्तर में वृद्धि हुई; इसके विपरीत, पीडी-1 और सीटीएलए-4 जैसे कमी मार्करों की अभिव्यक्ति में कमी आई, और अंतिम रूप से समाप्त टी कोशिकाओं के अनुपात में कमी आई।
जन्मजात प्रतिरक्षा प्रणाली से प्राकृतिक हत्यारा कोशिकाएँ, डेंड्राइटिक कोशिकाएँ और उनके कार्य भी इसी तरह TIM-3 द्वारा नकारात्मक रूप से विनियमित थे। विशेष रूप से डेंड्राइटिक कोशिकाओं में, TIM-4 की एक विशिष्ट उच्च अभिव्यक्ति भी होती है। शोध दल ने पाया कि ML-T7 न केवल प्राकृतिक हत्यारा कोशिकाओं की हत्या गतिविधि को बढ़ाता है, बल्कि डेंड्राइटिक कोशिकाओं की परिपक्वता को भी बढ़ावा देता है और TIM-3 और TIM-4 पर कार्य करके उनकी एंटीजन-प्रस्तुति क्षमता को बढ़ाता है।
प्राथमिक हेपेटोसेलुलर कार्सिनोमा माउस मॉडल की विविधता का उपयोग करते हुए, उन्होंने ML-T7 के चिकित्सीय प्रभावों का अवलोकन किया। परिणामों से पता चला कि 20 मिलीग्राम/किग्रा या 50 मिलीग्राम/किग्रा की खुराक पर ML-T7 के साथ उपचार हर दो दिन में इंट्रापेरिटोनियल रूप से इंजेक्ट किया गया, जिससे ट्यूमर की वृद्धि में काफी कमी आई और चूहों के जीवित रहने का समय बढ़ा और नियंत्रण समूह की तुलना में ट्यूमर माइक्रोएनवायरनमेंट की प्रतिरक्षा दमनकारी प्रकृति को कम किया।
आगे के अध्ययनों से पता चला कि 20 मिलीग्राम/किग्रा एमएल-टी7 उपचार में अकेले 100 मिलीग्राम/किग्रा पीडी-1 अवरोधक उपचार के समान ट्यूमर विरोधी गतिविधि थी, और संयोजन में उपयोग किए जाने पर दोनों का एक सहक्रियात्मक प्रभाव था, जिससे ट्यूमर माइक्रोएनवायरनमेंट में सीडी8-पॉजिटिव टी कोशिकाओं और प्राकृतिक हत्यारा कोशिकाओं को फिर से सक्रिय किया गया। संयोजन के साथ उपचार के 120 दिनों के बाद, 50% चूहे बच गए (3/6 चूहे), जबकि एमएल-टी7 या पीडी-1 अवरोधक के साथ अकेले इलाज किए गए चूहे मुश्किल से बच पाए (0/6 चूहे या 1/6 चूहे बच गए)।
पीडी-1 अवरोधकों के साथ संयोजन चिकित्सा का प्रभाव
इसके अलावा, ML-T7 उपचार ट्यूमर कोशिकाओं के खिलाफ CAR-T कोशिकाओं की साइटोटॉक्सिसिटी को काफी हद तक बढ़ा सकता है, जबकि CAR-T कोशिकाओं को अपोप्टोसिस को कम करने और स्पष्ट मेटास्टेसिस के बाद प्रसार को बढ़ाने के लिए प्रेरित करता है। इसके अलावा, ML-T7 उपचार ने CAR-T सेल थेरेपी में मुश्किल समस्या को प्रभावी ढंग से दूर किया, यानी, कार्यात्मक कमी को रोकना, इस प्रकार CAR-T सेल प्रभावकारिता में सुधार हुआ, जिसमें 10 μM ML-T7 CAR-T सेल कमी को उलटने में सबसे प्रभावी था।
CAR-T कोशिकाओं की वृद्धि के लिए
सुरक्षा की दृष्टि से, एम.एल.-टी7 को अच्छी तरह सहन किया गया, तथा एम.एल.-टी7 की 50 मि.ग्रा./कि.ग्रा. खुराक को हर दो दिन में पेट के अन्दर इंजेक्ट करने से चूहों में कोई महत्वपूर्ण प्रतिकूल प्रभाव नहीं पड़ा।
कुल मिलाकर, इस अध्ययन ने ट्यूमर इम्यूनोथेरेपी में उपयोग के लिए टीआईएम-3 के एक छोटे अणु अवरोधक एमएल-टी 7 की महान क्षमता को प्रदर्शित किया। एमएल-टी 7 न केवल अकेले लड़ने में अच्छा है, बल्कि सीएआर-टी सेल थेरेपी और पीडी-1 अवरोधक थेरेपी की एंटी-ट्यूमर गतिविधि को बढ़ाने में भी सक्षम है, जो सुरक्षित और प्रभावी है, और नैदानिक अनुवाद के लिए आगे विकसित होने योग्य है।
